fa بهبود روش باززایی و انتقال ژن به گیاه زینتی بنفشه آفریقایی در شرایط کشت درون شیشه‌‌ای بیوتکنولوژی و کشت بافت Biotechnology and Tissue culture پژوهشي Research <div style="text-align: justify;"><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">بنفشه آفریقایی یک گیاه زینتی تجاری با رنگ</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">های مختلف است. به‌منظور باززایی مستقیم، این گیاهچه، ابتدا در آزمایش اول که به‌صورت آزمایش فاکتوریل در قالب طرح به‌طور کامل تصادفی اجرا شد. اثر ریزنمونه‌های برگ، گره، دمبرگ، ریشه، گلبرگ و کاسبرگ در چهار رقم در محیط کشت‌‌ </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">MS‌</span></span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">حاوی غلظت‌‌های مختلف هورمون‌های‌‌</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">NAA</span></span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">‌‌+‌‌</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">BAP</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">‌‌</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> و</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">IBA</span></span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">+‌‌</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">BAP</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">‌‌</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">برای تولید شاخساره‌‌</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">بررسی شد. سپس </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">در آزمایش دوم آستانه تحمل</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">ریزنمونه‌‌‌‌های برگ و دمبرگ</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">به آنتی‌‌بیوتیک‌‌های هیگرومایسین و کانامایسین با کشت در محیط کشت</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">‌‌</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">های انتخابی دارای غلظت‌‌های مختلف از این دو آنتی</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:12.0pt;">‌‌</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">بیوتیک ارزیابی گردید. پس از مشخص شدن غلظت مناسب آنتی‌‌بیوتیک برای محیط کشت انتخابی، انتقال ژ</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">ن‌‌های ‌‌</span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">AS1</span></span></span></em><strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">‌‌ </span></span></strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">و </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">4&#39;CGT</span></span></span></em> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">به</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">ترتیب</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">با استفاده</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">از آگروباکتریوم سویه </span></span><em><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">LBA4404</span></span></span></em> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">حاوی پلاسمید‌‌های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">pCAMBIA1304</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> و</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">pBI121 </span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">&nbsp;انجام شد. از روش واکنش زنجیره‌‌ای پلی‌‌مراز برای شناسایی گیاهان تراریخته استفاده شد. </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">نتیجه‌های آزمایش اول مشخص نمود که ریزنمونه برگ </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">مناسب‌‌ترین ریزنمونه و</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> محیط کشت‌‌</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> حاوی یک میلی</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size:12.0pt;">‌‌</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">گرم بر لیتر </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">IBA</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> و </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">‌‌</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">‌‌BAP</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">‌‌</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">در هر چهار رقم، ‌‌بهترین ترکیب بود. نتیجه‌های آزمایش دوم نشان داد که محیط </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">M4</span></span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">(‌‌به ترتیب حاوی 50 و 75 میلی‌‌گرم در لیتر کانامایسین و هیگرومایسین) به‌طور کامل از باززایی نمونه‌‌های غیرتراریخت جلوگیری می‌‌کند. در انتها گیاهان تراریخته</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن‌‌های مورد آزمایش انتخاب شدند.</span></span></div> <div style="text-align: justify;">African violet is a commercial ornamental plant with various colors. For direct regeneration, in the first experiment, the effect of leaf, node, petiole, root, petal and sepal explants of four African violet cultivars were evaluated on MS medium containing different concentrations of NAA+BAP and IBA+BAP hormones, which was performed as a factorial in a completely randomized design. In the second experiment, the tolerance threshold of leaf and petiole explants to Hygromycin and Kanamycin antibiotics was evaluated by culturing on selective media supplemented with different concentrations of given antibiotics. After determining the suitable concentrations of the antibiotics for selective medium, the transformation of <em>AS1</em> and <em>4&#39;CGT</em> genes was conducted with <em>Agrobacterium</em> <em>LBA4404</em> strain containing pCAMBIA1304 and pBI121 plasmids, respectively. PCR method was used for the detection of transgenic plants. First experiment revealed that the leaf explant was the best sample and MS medium containing 1 mg L^-1 IBA+1 mg L^-1 BAP was the best combination for <em>in vitro</em> regeneration of all genotypes. The results of the second experiment showed that the M4 medium (containing 50 and 75 mg L^-1 Kanamycin and Hygromycin, respectively) completely inhibited the regeneration of non-transformed samples. Finally, transgenic plants were selected using PCR with specific primers for transferred genes.</div> بنفشه آفریقایی, ریزنمونه, دست ‌‌ورزی ژنتیکی, شاخه‌‌زایی مستقیم, کشت بافت African violet, Explants, Genetic manipulation, Directs branching, Tissue culture. 237 248 http://journal-irshs.ir/browse.php?a_code=A-10-250-3&slc_lang=fa&sid=1 Amir Rajabi امیر رجبی amir.rajabi1368@gmail.com 10031947532846007784 10031947532846007784 No دانشگاه زابل Leila Fahmideh لیلا فهمیده leila.fahmideh@yahoo.com 10031947532846007785 10031947532846007785 Yes دانشگاه زابل-دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان Mojtaba keikhasaber مجتبی کیخاصابر mkeykhasaber@yahoo.com 10031947532846007786 10031947532846007786 No دانشگاه زابل Valiollah Ghasemi Omran ولی اله قاسمی عمران ghasemiomran@yahoo.com 10031947532846007787 10031947532846007787 No دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری